А. В. Палиенко руководство к практическим занятиям по курсу «Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований» раздел «Морфология микроорганизмов»




Скачать 351.75 Kb.
НазваниеА. В. Палиенко руководство к практическим занятиям по курсу «Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований» раздел «Морфология микроорганизмов»
страница1/3
Дата конвертации15.12.2012
Размер351.75 Kb.
ТипРуководство
  1   2   3


«Энгельсский медицинский колледж»


РУКОВОДСТВО ДЛЯ СТУДЕНТОВ

К ПРАКТИЧЕСКИМ ЗАНЯТИЯМ

ПО МИКРОБИОЛОГИИ








«Энгельсский медицинский колледж»


А.В. Палиенко


РУКОВОДСТВО К ПРАКТИЧЕСКИМ ЗАНЯТИЯМ

по курсу «Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований»

раздел «Морфология микроорганизмов»


Руководство для студентов

отделения 060110 «Лабораторная диагностика»


г. Энгельс, 2009 г.

РЕЦЕНЗИЯ

на руководство к практическим занятиям

по курсу «Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований»

раздел «Морфология микроорганизмов»,

составленное преподавателем микробиологии А.В. Палиенко

Представленная работа составлена в соответствии Государственного стандарта и квалификационной характеристики специальности 060110 «Лабораторная диагностика». Построено в соответствии современными педагогическими и методическими требованиями. Данное руководство обеспечит самостоятельность студентов в работе на практических занятиях по микробиологии и облегчит педагогический процесс. Для эффективного усвоения материала имеются вопросы и тестовые задания для студенческого самоконтроля. По каждому занятию указан объем выполняемой практической работы. Приведенные в работе алгоритмы, рисунки, схемы помогут систематизировать и закрепить знания студентов по данной теме.

В руководстве приводится микроскопический метод исследования микроорганизмов, который позволяет изучить тинкториальные и морфологические свойства микроба, степень чистоты выделенной культуры, расположение микроорганизмов в мазках, выявить структуры клетки – споры, капсулы, определить подвижность микроба, дифференцировать кислотоустойчивые бактерии. Все эти признаки необходимы для идентификации микроорганизма. С помощью этого метода можно подтвердить клинический диагноз инфекционных заболеваний.

Учебное пособие предназначено для использования во время практических занятий по микробиологии раздел «Морфология микроорганизмов», а также для самостоятельной работы студентов дома.


Рецензент: Глинская Е.В., к.б.н., доцент кафедры микробиологии и физиологии растений биологического факультета СГУ им. Н.Г.Чернышевского


СОДЕРЖАНИЕ

Предисловие…………………………………………………...……...5

Введение в практикум………………………………………………..6

Занятие №1……………………………………………………………8

Занятие №2……………………………………………………………16

Занятие №3……………………………………………………………19

Занятие №4……………………………………………………………22

Занятие №5…………………………………………………………....24

Занятие №6…………………………………………………………....26

Ответы на тестовые задания ………………………………………...31

Список литературы…………………………………………………..32

Приложение №1……………………………………………………....33

Приложение №2……………………………………………………....35


ПРЕДИСЛОВИЕ

Лабораторные занятия проводятся в специально оборудованных помещениях, имеющих подводку электричества к каждому рабочему месту, а также раковину с водопроводной водой. Поверхность рабочих столов покрыта стеклом для лучшей дезинфекции. За каждым студентом закрепляется постоянное рабочее место, на котором должно быть оборудование, необходимое для выполнения конкретного задания, рабочая тетрадь, ручка и карандаш. Для личных вещей отводится специальное место.

В начале занятия студенты знакомятся с определенным заданием, изложенным в учебном пособии, делают записи основных методик в рабочей тетради, а затем приступают к выполнению работы под наблюдением преподавателя. Результаты исследований в виде рисунков, описаний морфологии микроорганизмов заносятся в тетрадь, и работа представляется преподавателю для проверки.

В связи с тем, что на практических занятиях студенты работают с живыми культурами микробов, анилиновыми красителями, химическими веществами, а также используют электрические приборы (лампы) и спиртовки, они обязаны выполнять основные правила техники безопасности (приложение №1,2).

Все задания студентами выполняются самостоятельно в соответствии с задачами, поставленными в учебном пособии.

Автор будет признателен за все замечания и предложения по содержанию включенного материала и совершенствованию методики обучения.


ВВЕДЕНИЕ В ПРАКТИКУМ

Микроскоп (рис.1) - оптический прибор для изучения микрообъектов. Студенческие лаборатории чаще оснащены микроскопами МБИ-1 . В научных и практических микробиологических лабораториях используют микроскопы отечественных марок: МБР – 1, МБИ-1, МБИ-2, МБИ-3, Биолам Р-1 и другие. Они предназначены для изучения формы, структуры, размеров и других признаков микроорганизмов, величина которых не менее 0.2-0.3 мкм. Поскольку микро­бы очень малы, то измеряются они в микрометрах (мкм - тысячная доля миллиметра) и потому изучение их возможно только с помощью микроскопов, дающих достаточно большое увеличение. Общее увеличение микроскопа слагается из произведения увеличений объектива и окуляра. Обычно при микробиологических исследованиях для получения полезного увеличения в 600-1000 раз используют объективы с увеличением в 90-100 раз и окуляры, увеличивающие изображение в 7-10 раз.


Объективы подразделяются на сухие и иммерсионные (погруженные). При работе с сухими объ­ективами между фронтальной линзой и изучаемым объектом находится воздух. При этом, в виду раз­ницы коэффициентов преломления предметного сте­кла и воздуха, часть световых лучей отклоняется и не попадает в объектив.

Объективы иммерсионные обозначают буквами О.И. и цифрами х90 и х100.

Современные микроскопы имеют ряд усовершенствований. Так, бинокулярный микроскоп с двумя тубусами дает возможность вести наблюдение однов­ременно обоими глазами.

Для изучения неокрашенных объектов используется фазово-контрастное устройство, с помощью которого можно получить четкое контрастное изображение прозрачных, не имеющих окраски микроорганизмов. При прохождении света через окрашенный препарат, изменяется интенси­вность света (амплитуда световой волны), что лег­ко улавливается глазом. При прохождении же пучка света через неокрашенный, прозрачный объект изме­няется только скорость его движения, т.е. фаза ко­лебаний светового луча, что глазом не улавливается. Принцип фазово-контрастного устройства заклю­чается в переводе невидимых колебаний света в амплитудные видимые.

В ряде специальных исследований, в частности при изучении внутри­клеточных структур микроорганизмов, используется люминесцентная микроскопия, основанная на способности некоторых объектов при специальном окрашивании флюорохромами светиться в коротковолновых лучах света (ультрафиолетовых, синих и др.). К флюорохромам относятся акридиновый желтый, пиронин, акридиновый оранжевый. Люминесцентная микроскопия проводится с обычным микроскопом, сна­бженным источником ультрафиолетовых лучей и набором светофильтров, вы­деляющих коротковолновую часть спектра.

Наиболее совершенными приборами, дающими возможность получать полезное увеличение объекта в 200-500 тыс. и более раз, являются электронные микроскопы, в которых вместо световых лучей используется поток электронов. С помощью электронных микроскопов удается рассмотреть белковые молекулы.




Рис. Микроскоп:

1 – окуляр, 2 – тубус,

3 – тубусодержатель,

4 – револьвер объективов,

5 – предметный столик,

6 – конденсор,

7 – микровинт, 8 – макровинт

9 – зеркало, 10 - основание


ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ №1

Простые и сложные методы окрашивания. Окраска препаратов по методу Грама. Способы приготовления красителей.

Студент должен знать:

- технику безопасности в кабинете (лаборатории) микробиологии (приложение №1),

- требования к помещению и оборудованию в лаборатории (приложение №2),

- характеристика «грязной» и «чистой» зоны лаборатории. Перечень комнат и их предназначение,

- требования к проведению работ в бактериологической лаборатории,

- спецпрофилактика сотрудникам лаборатории,

- этапы приготовления препарата, его фиксация: виды и цель,

- простые методы окрашивания,

- сложные методы, сущность метода Грама,

- особенности окраски по методу Грама, красители и реактивы,

- подготовка насыщенных, водных растворов и красителей.

Студент должен уметь:

- доставка патологического материала. Материал на патогенные биологические агенты (ПБА),

- прием материала в регистратуре,

- обработка отработанного материала и лабораторной посуды,

- поведение при «аварии» в лаборатории,

- приготовление бактериального препарата,

- окраска препарата по методу Грама,

-микроскопия окрашенных препаратов с использованием иммерсионной системы,

- соблюдение мер безопасной работы с живыми культурами микробов,

- обработка рабочего места и рук дез. веществами.


Этапы самостоятельной аудиторной работы:

  1. Подготовить препараты и окрасить их простым методом и по методу Грама

  2. Препараты промикроскопировать с иммерсией

  3. Обработать рабочие места и руки

  4. Зарисовать результаты микроскопирования в дневник



Рецепты приготовления красителей

  1. Карболовый фуксин Циля:

- насыщенного спиртового раствора основного фуксина – 10 мл

- раствора карболовой кислоты 5% - 90мл

Внимание! Карболовую кислоту вливают в краситель, а не наоборот. Смесь встряхивают, фильтруют и сливают во флакон


Или

- основной фуксин в порошке - 1 гр

- карболовая кислота кристаллическая -5 гр

- глицерин -0,5 мл

- спирт 96% - 10 мл

- вода дистиллированная - 100мл

2. Насыщенные спиртовые растворы (исходные):

- красителя - 1гр

- спирта 96% - 10 мл

Смесь помещают в термостат на несколько дней до полного растворения. Взбалтывают ежедневно, хранят с притертыми пробками

  1. Фуксин Пфейффера:

- фуксин Циля – 1 мл

- воды дистиллированной – 9 мл

Готовят непосредственно перед употреблением, т.к. раствор нестойкий.

  1. Бумага по Синеву:

- 1%спиртовой раствор кристаллического фиолетового:

на 100 мл 96% спирта добавляют 1 гр сухого красителя и 3 мл глицерина

Полоски фильтровальной бумаги пропитывают раствором и высушивают.


ЭТАПЫ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПРЕПАРАТА

  1. Приготовление мазка

  2. Высушивание

  3. Фиксация

  4. Окрашивание



АЛГОРИТМ ПРИГОТОВЛЕНИЯ МАЗКА

из культуры, выращенной на скошенном агаре(«косячке»)

  1. Предметное стекло аккуратно берут за ребро и с обратной стороны нанесения мазка наносят его границы и номер культуры

  2. Зажигают спиртовку, горелку, предварительно выпустив пары спирта

  3. Фламбируют поверхность стекла, где будет располагаться мазок

  4. Стекло помещают вблизи спиртовки на чашку Петри

  5. В левую руку берут пробирку со стерильным физическим раствором (дистиллированной водой) и помещают между 1 и 2 пальцами таким образом, что ладонь находится под пробиркой и горлышко пробирки направлено в зону спиртовки

  6. В правую берут бактериальную петлю, как карандаш

  7. Петлю фламбируют до покраснения сначала горизонтально, затем вертикально (рис. №1)



  1. Не выпуская петли, мизинцем правой руки прижимают пробку физ.р-ра к ладони и осторожно вынимают е из пробирки. Движения должны быть плавными

  2. Горло пробирки обжигают в пламени и вводят петлю

  3. Берут выпускной петлей физ. р-р и выносят на стекло пару капель в границы мазка

  4. Закрывают пробку, предварительно проведя через пламя спиртовки пробку и горло пробирки одновременно

  5. Ставят пробирку в штатив

  6. В левую руку берут пробирку с культурой и помещают, как и пробирку с физ. р-ром (см. пункт №5), петля в правой руке

  7. Петлю фламбируют

  8. Над пламенем спиртовки спокойно вынимают пробку с культуры (см. пункт №8), одновременно обжигая пробку и горло пробирки

  9. Вводят в пробирку петлю, охлаждая ее о стенки пробирки

  10. Осторожно закрывают и захватывают петлей культуру, не повреждая агара, и вынимают петлю, не касаясь ею стенок пробирки

  11. Петлю с культурой вносят в каплю физ. р-ра и осторожно эмульгируют, незаходя за границы мазка

  12. Бактериальную петлю с остатками культуры прожигают до покраснения в пламени спиртовки

  13. Прожигают горло пробирки пробку в пламени, одновременно. Закрывают пробирку.

  14. Пробирку с культурой и петлю ставят в штатив

  15. Приготовленный мазок высушивают либо на воздухе либо высоко над пламенем спиртовки



Примечание:

  1. Приготовление мазка из культуры, выращенной на жидкой питательной среде, не требует использования физ. р-ра. Мазок готовят согласно пунктам №13 -№22

  2. При приготовлении мазка из культуры, выросшей на чашке Петри необходимо:

  • отметить изолированную колонию со стороны дна чашки

  • чашку берут в левую руку и в сторону спиртовки приоткрывают крышку, придерживая ее 1и 2 пальцами левой руки

  • прокаленную петлю вводят под крышку чашки, остужая ее о крышку

  • осторожно откалывают часть выделенной колонии и, не задевая края чашки, выносят на стекло с физ. р-ром

  • дальнейшие манипуляции согласно пунктам №18, 19, 21, 22

  1. При подсушивании мазка следует помнить: высокая температура может нарушить структуру клетки



Рис. №1. Схема приготовления мазка

Виды фиксации

  • Физический – в пламени спиртовки

  • Химический – в растворах спирта, ацетона, смеси Никифорова (1:1 спирт и эфир)



Цели фиксации

  • Обеззараживание патогенных микробов

  • Закрепление клеток на стекле

  • Убитые микроорганизмы лучше воспринимают красители



СПОСОБ ГРАМА

  1. На фиксированный мазок нанести генцианвиолет (бумага по Синеву) на 1-2 мин

  2. Краску слить и нанести раствор Люголя на 1 мин

  3. Раствор Люголя слить и на мазок нанести 96% спирт на 15-20 мин в зависимости от толщины мазка

  4. Спирт смыть дистиллированной водой

  5. Мазок дополнительно окрасить разведенным фуксином Пфейффера на 2-3 мин

  6. Краситель смыть водой, препарат высушить, промикроскопировать с иммерсией

  7. Микроскопия с иммерсией.



Генцианвиолет связывается с пептидогликаном клеточной стенки (рис. №2). Толстый слой пептидогликана грамположительных бактерий связывает много красителя, тонкий слой – грамотрицательных – мало. Раствор Люголя фиксирует краситель за счет образования комплекса – краситель-пептидогликан-йод. При обработке мазка спиртом грамотрицательные микроорганизмы быстро теряют краситель и обесцвечиваются, а грамположительные остаются окрашенными в синий цвет. Дополнительный краситель окрашивает грамотрицательные микроорганизмы в красный цвет

Грамположительные (Гр+) бактерии окрашиваются в сине-фиолетовый цвет. Грамотрицательные (Гр-) бактерии окрашиваются в красный цвет.


Рис. № 2. Грамотрицательные и грамположительные бактерии



Грамположительные микроорганизмы







Грамотрицательные микроорганизмы
















  1   2   3

Добавить в свой блог или на сайт

Похожие:

А. В. Палиенко руководство к практическим занятиям по курсу «Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований» раздел «Морфология микроорганизмов» iconМетодические рекомендации для студентов к практическим занятиям по патологической анатомии
Тема: «Морфология обратимого и необратимого повреждения клеток и тканей: морфология нарушений углеводного и пигментного обмена. Морфология...

А. В. Палиенко руководство к практическим занятиям по курсу «Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований» раздел «Морфология микроорганизмов» iconРабочая программа дисциплины «промышленная микробиология и биотехнология»
Цель курса изучение микробиологических процессов, которые лежат в основе крупных промышленных микробиологических производств (получение...

А. В. Палиенко руководство к практическим занятиям по курсу «Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований» раздел «Морфология микроорганизмов» iconИсследование влияния аэродинамических характеристик теплообменного оборудования и схемотехнических решений систем комплексного использования теплоты на энергопотребление установок методические указания к практическим занятиям по курсу «Энергосбережение»
Методические указания к практическим занятиям по курсу «Энергосбережение». Ростов н/Д: Рост гос строит ун-т, 2007. 32 с

А. В. Палиенко руководство к практическим занятиям по курсу «Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований» раздел «Морфология микроорганизмов» iconПрограмма производственной практики по профилю специальности профессионального модуля пм. 04 Проведение лабораторных микробиологических исследований мдк. 04. 01. Теория и практика проведения микробиологических лабораторных исследований
Государственное бюджетное образовательное учреждения среднего профессионального образования

А. В. Палиенко руководство к практическим занятиям по курсу «Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований» раздел «Морфология микроорганизмов» iconМорфология микроорганизмов. Этапы развития
Этапы развития: описатель. (Левенгук 17-19 вв.), физиологич. (Пастер, Кох), меч-никовский (20 в.). Мед микробиология: мех-мы инф-ций,...

А. В. Палиенко руководство к практическим занятиям по курсу «Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований» раздел «Морфология микроорганизмов» iconЛитература по курсу «Общая гигиена» для студентов медицинского факультета по специальности «Фармация»
Пивоваров Ю. П. Руководство к лабораторным занятиям по гигиене с основами экологии человека. М.: Икар, 1998

А. В. Палиенко руководство к практическим занятиям по курсу «Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований» раздел «Морфология микроорганизмов» iconРуководство к практическим занятиям учащихся химико-биологических классов по разделу «Общая генетика»
Белоусов Д. Л. Руководство к практическим занятиям учащихся химико-биологических классов по разделу «Общая генетика». Троицк, 2009....

А. В. Палиенко руководство к практическим занятиям по курсу «Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований» раздел «Морфология микроорганизмов» iconКалендарный план лекций по экологии микроорганизмов для студентов 3 курса эколого-биологического факультета специальности экология природопользования
...

А. В. Палиенко руководство к практическим занятиям по курсу «Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований» раздел «Морфология микроорганизмов» iconМетодическое пособие по курсу «Основы инженерного проектирования» для студентов, обучающихся по направлению «Энергомашиностроение»
Корж Д. Д. Практика проектирования. Руководство к лабораторно-практическим занятиям: Методическое пособие ­– М.: Издательство мэи,...

А. В. Палиенко руководство к практическим занятиям по курсу «Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований» раздел «Морфология микроорганизмов» iconМетодические указания к практическим занятиям по курсу «Теоретические основы проектирования систем комплексного энерготехнологического использования природного газа»
Теплотехнические расчеты при сжигании углеводородного топлива. Методические указания к практическим занятиям по курсу «Теоретические...


Разместите кнопку на своём сайте:
lib.convdocs.org


База данных защищена авторским правом ©lib.convdocs.org 2012
обратиться к администрации
lib.convdocs.org
Главная страница